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使用細胞計數(shù)器的三個tip

更新時間:2023-12-11  |  點擊率:1018

 使用細胞計數(shù)器的三個tip

市場上近幾年涌現(xiàn)出不少自動細胞計數(shù)器。這種儀器利用光學(xué)顯微鏡技術(shù),但帶來了更高的準(zhǔn)確性、重復(fù)性,并將這一單調(diào)的工作自動化。樣品體積小也是這種細胞計數(shù)器的額外優(yōu)勢。許多儀器使用一次性的玻片,只需要10-20 uL樣品。將玻片插入自動細胞計數(shù)器中,照相機捕獲圖像。隨后內(nèi)置的軟件分析圖像,顯示細胞數(shù)量等信息。
在此,專家介紹了使用自動細胞計數(shù)器的三個tip。
準(zhǔn)確對焦
與其他光學(xué)顯微鏡一樣,儀器的準(zhǔn)確對焦對于計數(shù)很關(guān)鍵。在手動計數(shù)時,訓(xùn)練有素的大腦可輕松鑒定細胞。然而,自動細胞計數(shù)器內(nèi)的照相機檢測活細胞的亮中心和暗邊緣,將其處理成黑白像素信息。如果細胞未準(zhǔn)確對焦,那么亮中心將有明顯的灰度,會被誤認為是死細胞。
大部分研究人員將會發(fā)現(xiàn)對焦并不難,只要顯示在屏幕上的圖像質(zhì)量與傳統(tǒng)的顯微鏡相似。確保你有一張清晰的圖像,這很重要。另一點是要了解細胞計數(shù)器中照相機的分辨率。如果自動細胞計數(shù)器以低的幀速顯示,如每秒小于15幀,那么顯示的圖像將不能實時響應(yīng)聚焦旋鈕的微調(diào)。
控制玻片之間的差異
大部分基于圖像的自動細胞計數(shù)器都使用一次性的玻片,其上有明確的測量區(qū)域。這一測量區(qū)域被物鏡的放大率和照相機的圖像傳感器大小所設(shè)定。這些細胞計數(shù)器通常測定0.4-0.5 uL樣品,相當(dāng)于血球計數(shù)器的4-5個大方格。
與血球計數(shù)器不同,計數(shù)玻片通常只使用一次。因此,玻片之間的差異會顯著影響細胞計數(shù)的結(jié)果。對于某一組實驗,好使用同一批號的玻片,盡量避免這些差異。在更換批號時,也建議用標(biāo)準(zhǔn)的微珠來檢驗玻片。大部分細胞計數(shù)器制造商都提供已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)微珠。使用相同的微珠樣品來檢驗不同的玻片,將有助于發(fā)現(xiàn)差異。
評估軟件的分簇性能
自動細胞計數(shù)器的核心是開展分析的軟件,它相當(dāng)于手動計數(shù)時的人腦。大部分的自動細胞計數(shù)器包含集成軟件,能準(zhǔn)確地計算單細胞群體的數(shù)量。然而,在談到成簇細胞的計數(shù)時,細胞計數(shù)器就會存在明顯差異。由于從培養(yǎng)細胞中獲得的樣品并不總是單細胞群體,因此,有時會有多個細胞團塊,而自動細胞計數(shù)器的分簇(declustering)性能也仔細評估。評估分簇性能時可開展圖1的檢測。
圖1. 將HL-60細胞加熱到70°C,處理20分鐘,殺死細胞,獲得死細胞樣品。隨后利用兩款不同的自動細胞計數(shù)器進行樣品的檢測。在細胞計數(shù)之后,根據(jù)軟件捕獲的圖像進行比較。紅色圓圈:死細胞;藍色圓圈:活細胞;黑色圓圈:排除的對象。
自動細胞計數(shù)器正在取代單調(diào)乏味的手動計數(shù)方法。隨著對一些基本原理的了解,自動細胞計數(shù)器將幫助你獲得佳的結(jié)果。

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