使用細胞計數器的三個tip

市場上近幾年涌現(xiàn)出不少自動細胞計數器。這種儀器利用光學顯微鏡技術，但帶來了更高的準確性、重復性，并將這一單調的工作自動化。樣品體積小也是這種細胞計數器的額外優(yōu)勢。許多儀器使用一次性的玻片，只需要10-20 uL樣品。將玻片插入自動細胞計數器中，照相機捕獲圖像。隨后內置的軟件分析圖像，顯示細胞數量等信息。
在此，專家介紹了使用自動細胞計數器的三個tip。
準確對焦
與其他光學顯微鏡一樣，儀器的準確對焦對于計數很關鍵。在手動計數時，訓練有素的大腦可輕松鑒定細胞。然而，自動細胞計數器內的照相機檢測活細胞的亮中心和暗邊緣，將其處理成黑白像素信息。如果細胞未準確對焦，那么亮中心將有明顯的灰度，會被誤認為是死細胞。
大部分研究人員將會發(fā)現(xiàn)對焦并不難，只要顯示在屏幕上的圖像質量與傳統(tǒng)的顯微鏡相似。確保你有一張清晰的圖像，這很重要。另一點是要了解細胞計數器中照相機的分辨率。如果自動細胞計數器以低的幀速顯示，如每秒小于15幀，那么顯示的圖像將不能實時響應聚焦旋鈕的微調。
控制玻片之間的差異
大部分基于圖像的自動細胞計數器都使用一次性的玻片，其上有明確的測量區(qū)域。這一測量區(qū)域被物鏡的放大率和照相機的圖像傳感器大小所設定。這些細胞計數器通常測定0.4-0.5 uL樣品，相當于血球計數器的4-5個大方格。
與血球計數器不同，計數玻片通常只使用一次。因此，玻片之間的差異會顯著影響細胞計數的結果。對于某一組實驗，好使用同一批號的玻片，盡量避免這些差異。在更換批號時，也建議用標準的微珠來檢驗玻片。大部分細胞計數器制造商都提供已知濃度的標準微珠。使用相同的微珠樣品來檢驗不同的玻片，將有助于發(fā)現(xiàn)差異。
評估軟件的分簇性能
自動細胞計數器的核心是開展分析的軟件，它相當于手動計數時的人腦。大部分的自動細胞計數器包含集成軟件，能準確地計算單細胞群體的數量。然而，在談到成簇細胞的計數時，細胞計數器就會存在明顯差異。由于從培養(yǎng)細胞中獲得的樣品并不總是單細胞群體，因此，有時會有多個細胞團塊，而自動細胞計數器的分簇（declustering）性能也仔細評估。評估分簇性能時可開展圖1的檢測。
圖1. 將HL-60細胞加熱到70°C，處理20分鐘，殺死細胞，獲得死細胞樣品。隨后利用兩款不同的自動細胞計數器進行樣品的檢測。在細胞計數之后，根據軟件捕獲的圖像進行比較。紅色圓圈：死細胞；藍色圓圈：活細胞；黑色圓圈：排除的對象。
自動細胞計數器正在取代單調乏味的手動計數方法。隨著對一些基本原理的了解，自動細胞計數器將幫助你獲得佳的結果。